کیت بررسی بیان پروتئین SDS-PAGE

کیت بررسی بیان پروتئین SDS-PAGE

الکتروفورز یک روش آنالیزی در بیوشیمی و سایر علوم زیستی است که برای جداسازی مولکول‌های باردار در یک میدان الکتریکی به کار می‌رود. الکتروفورز ژل سدیم دودسیل سولفات پلی‌آکریلامید (Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) نوعی الکتروفورز است که در آن از سدیم دودسیل سولفات استفاده می‌شود تا تاثیر ساختار و بار مولکول‌های پروتئین حذف گردیده و پروتئین‌ها تنها بر اساس طول زنجیره یا وزن مولکولی تفکیک شوند. در این روش مولکول‌های کوچک به دلیل مقاومت کمتر ماتریکس ژل سریع‌تر از مولکول‌های بزرگتر حرکت می‌کنند و در نتیجه مسافت بیشتری را در ژل طی می‌کنند.

SDS-PAGE یک سیستم الکتروفورزی ناپیوسته است که توسط لاملی ابداع شده است و توانایی تفکیک پروتئین‌ها با وزن مولکولی حدود ۵ الی ۲۵۰ کیلودالتون را دارد. در سیستم ناپیوسته ژل دارای دو بخش ژل متراکم کننده (ژل بالا) با pH 6.8 یا Stacking Gel و ژل جداکننده (ژل پایین) با pH 8.8 یا Resolving Gel می‌باشد که در ژل بالایی دارای منافذ بزرگتر، پروتئین‌های بارگذاری شده تغلیظ و آماده تفکیک بر اساس وزن مولکولی در ژل پایینی می‌شوند.

زمانی که بیان یک ژن مورد سنجش قرار می گیرد، می تواند در دو سطح ژنومی و پروتئومی بررسی شود. تکنیک های SDS-PAGE و Western جهت بررسی و سنجش تولید پروتئین های سلول ها به کار می روند. SDS-PAGE به اختصار به معنای Sodium Dodecyl Sulfate – PolyAcrylamide Gel Electrophoresis یا سدیم دودسیل سولفات-الکتروفورز با ژل آکریل آمید و پلی آکریل آمید می باشد.

SDS-PAGE

در این تکنیک پروتئین ها الکتروفورز شده و براساس اندازه در ژل مرتب می شوند. لذا این نوع تکنیک نیاز به سیستم الکتروفورز معمولی از نوع عمودی (به دلیل نوع ژل) دارد. در این SDS-PAGE از سدیم دودسیل سولفات (SDS) به جهت یکسان سازی بار پروتئین های لود شده در ژل و مرتب سازی فقط براساس وزن مولکولی می باشد. یعنی اگر پروتئین ها بدون SDS مورد سنجش قرار بگیرند، علاوه بر فاکتور وزن مولکولی، فاکتور بار هر یک پروتئین ها نیز در حرکت پروتئین ها دخیل خواهد بود. اما SDS سطح پروتئین ها را از بار منفی پر کرده و موجب هم بار شدن آن ها می گردد. در تکنیک SDS-PAGE فقط می توان حضور یا عدم حضور یک پروتئین را بررسی کرد و همچنین وزن مولکولی نسبی آن را مشخص نمود. البته باید توجه داشت که ممکن است دو پروتئین متفاوت وزن مولکولی یکسانی داشته و در SDS-PAGE در یک نقطه قرار بگیرند. اگر حعضور یا عدم حضور یک پروتئین نیاز به سنجش با حساسیت بالا داشته باشد، از تکنیک الکترفورز دو بعدی (2D-Electrophoresis) استفاده می شود. در تکنیک SDS-PAGE هر پروتئینی که وزنش کمتر باشد راحت تر از منافذ ژل عبور کرده و حرکت بیشتری در ژل خواهد داشت.