کیت های تخلیص پروتئین های نوترکیب

کیت های تخلیص پروتئین های نوترکیب

تشخیص ناخالصی بخش پر اهمیتی در روند تولید داروهای پروتئینی نوترکیب از جمله پروتئین‌های درمانی است. ناخالصی‌های خاص با منشا سلول‌های تولید کننده پروتئین، تحت عنوان DNA سلول میزبان (HCD) و پروتئین سلول میزبان (HCP) شناخته می شوند که باید تا حد ممکن حذف شوند. یکی از مهمترین زمینه های کاری لیوژن فارمد، تولید کیت های کنترل کیفی و سنجش ناخالصی داروهای نوترکیب می باشد. افراد علاقه مند به این پروژه، در زمینه بهینه سازی کیت های تولیدی شرکت و امکان سنجی تولید کیت های جدید فعالیت خواهند کرد. پروژه های مرتبط با این عنوان بدین شرح خواهند بود:

1. بهینه سازی استخراج مقادیر کم نوکلئیک اسید از دارو

2. بهینه سازی تشخیص کمی بقایای DNA سلول میزبان در داروهای نوترکیب به روش qPCR

3. راه اندازی و برپایی کیت های سنجش کمی بقایای پروتئین سلول میزبان در داروهای نوترکیب به روش الایزا

ساخت DNA نوترکیب

ساخت دنا نوترکیب یکی از اصلی‌ترین مراحل مهندسی ژنتیک است. از این رو حتی به مهندسی ژنتیک، فناوری ساخت دنا نوترکیب نیز گفته می‌شود. برای ساخت دنا نوترکیب به دو نوع آنزیم نیاز است. یکی برای بریدن ژن خارجی (ژن مورد نظر برای تکثیر یا محصول) و وکتور، به عنوان مثال پلازمید (دنا کوچک، حلقوی که در بعضی از باکتری‌ها وجود دارد) و قرار دادن ژن خارجی در وکتور و دومین آنزیم برای برقراری پیوند فسفو دی استر بین ژن خارجی و وکتور. برای بریدن دنا از آنزیم‌های محدودکننده استفاده می‌شود. آنزیم‌های محدودکننده آنزیم‌هایی باکتریایی هستند.

یعنی فقط ژن رمزکننده این آنزیم‌های پروتیینی در باکتری‌ها موجود می‌باشد و سلول‌های یوکاریوتی ژن رمزکننده این دسته از آنزیم‌ها را ندارند. آنزیم‌های محدودکننده توالی کوتاه و خاصی از دنا به نام جایگاه تشخیص آنزیم را شناسایی می‌کنند و آن‌ها را برش می‌دهند. بیشتر آنزیم‌هایی محدودکننده، توالی کوتاه و تک رشته‌ای را در دو انتهای دنا ای که برش می‌زنند ایجاد می‌کنند که به آن‌ها انتهای چسبنده می‌گویند. در مهندسی ژنتیک اغلب از آنزیم‌هایی که انتهای چسبنده ایجاد می‌کنند استفاده می‌شود مانند E.CORE1. انتهای چسبنده باعث می‌شود که پیوند هیدروژنی بین دو تک رشته دنا ایجاد شده توسط آنزیم محدودکننده(انتهای چسبنده) برقرار شود. بعد از برقراری پیوند هیدروژنی بین دو انتها، برای برقراری پیوند فسفو دی استر بین دو رشته دنا، از آنزیم پروتیینی لیگاز استفاده می‌شود. حال دنا نوترکیب آماده شده‌است.